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如何用牛津杯做微生物抑菌试验药敏实验
点击次数:4396 发布时间:2016-12-07

      抑菌试验/药敏实验方法主要有两种,即扩散法和稀释法。其中扩散法属手工测试方法,通过测试药物纸片或者牛津杯在固体培养基上的抑菌圈的大小,判断细菌对该种药物是否敏感。
稀释法包括试管稀释法和微量稀释法,通过测试细菌在含不同浓度药物培养基内的生长情况,判断其zui低抑菌浓度(MIC)。 
      由于扩散法操作简单,成本低,已经被大多数实验室和基层单位所采用。扩散法又包括纸片法、牛津杯法和打孔法。 
一、实验原理
1、将培养基平板置培养箱中培养,一方面试验菌(指示菌)开始生长繁殖;另一方面抗生素呈球面扩散,形成递减的梯度浓度,离杯越近,抗生素浓度越大,离杯越远抗生素浓度越小。
2、在牛津杯周围抑菌浓度范围内的细菌的生长被抑制,形成透明的抑菌圈。
3、抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度(药敏实验)或药物对指示细菌的抑菌程度(抑菌试验)。
4、抗生素浓度越高,抑菌圈越大。
5、在抑菌圈的边缘处,琼脂培养基中所含抑菌物质的浓度即为该菌悬液中对该种指示菌的zui低抑菌浓度(MIC) 。
6、抑菌圈直径与药物对测试菌的zui低抑菌浓度 呈负相关,即抑菌圈愈大,MIC愈小。
二、实验材料
培养基:牛肉膏蛋白胨固体培养基
菌种:大肠杆菌(E.coli)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)
药品:阿莫西林、黄芪多糖、
其他:牛津杯、培养皿、酒精棉、酒精灯、涂布器、移液枪、1mL、200uL枪头、恒温培养箱、超净工作台、接种环
牛津杯”可从北京吉泰远成科技有限公司采购,牛津杯是内径为6mm,外径为7.8mm,高10mm的圆筒形管子,管子的重量尽可能相等。 
三、实验操作
1. 倒平板:将已灭菌的琼脂培养基加热到完全融化,倒在培养皿内,每皿约20ml,凝固。
2. 标记:菌种、牛津杯摆放位置、药物及其 浓度
3. 制备菌悬液:用生理盐水洗下试管内的菌苔并稀释。
4. 菌液涂布:吸取1mL 菌液入平板表面,用涂布器涂布将菌液涂布均匀
5. 摆放牛津杯:在培养基表面垂直摆放牛津杯,轻轻加压,使其与培养基接触无空隙。

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