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药典级牛津杯测定抗生素的抑菌实验
点击次数:7728 更新时间:2017-07-16
药典级牛津杯测定抗生素的抑菌实验
一、目的:观察抗生素的抑菌效果,掌握药典级牛津杯体外测定抗生素的抗菌活性。
二、原理: 抗生素从孔洞向琼脂培养基扩散渗透,通过对试验菌的抑杀作用而影响细菌生长繁殖,使菌落形成抑菌圈,依抑菌圈的大小确定抗生素抗菌能力的强弱。
三、材料
1. 菌种:金黄色葡萄球菌,用营养肉汤培养16~18 h得到的菌液。
2. 药品:氨苄青霉素,肉汤培养基。
3. 器材:药典级牛津杯、涂布棒、生化培养箱、高压蒸汽灭菌锅、水浴锅、灭菌肉汤琼脂培养基、酒精灯、平皿、吸管、0.5cm纸片、镊子、记号笔、尺子等。
四、实验步骤
1.按照培养基的配制方法步骤配制好肉汤培养基,并在121℃,灭菌20 min后,放在60 ℃水浴锅中保温,注意温度恒定,不要让培养基凝固。
2. 将用于试验的防腐剂(抑菌物质)配制成2个所需的浓度(10ug/ml,30ug/ml)。
3.将已经培养好的菌制成一定浓度(106cfu/mL)的悬浮液,用移液管移取1 mL该菌悬液至灭过菌的(121℃,20分钟)培养皿中,倒入15 mL已灭菌的培养基(温度约45℃,用手摸瓶壁不感觉烫手即可),轻轻转动培养皿,使培养基与菌液混匀,静置凝成平板。
4.将凝固后的平板用灭菌后的打孔器在平板上打孔(4个孔洞),并挑出培养基。(或将已灭菌的药典级牛津杯依次轻轻放置在平板上)
5.按照顺时针方向依次在每个孔洞(或药典级牛津杯)中加入抑菌剂,以无菌水做空白对照,每种抑菌剂的浓度做三个平行样。
6.在37 ℃下培养24 h观察,用尺子测量抑菌圈的大小。
五、注意事项
1.应在无菌条件下操作,试验完毕后及时灭菌处理。
2.添加抑菌剂的时候注意滴到其他地方,以免影响观察。